Denis Pushilin sinh ngày 9 tháng 5 năm 1981[1] tại thành phố Makiivka, tỉnh Donetsk, CHXHCN Xô viết Ukraina.[2][3] Bố mẹ ông, ông Vladimir Pushilin và bà Valentina Khasanova, đều từng là công nhân của Nhà máy luyện kim Makiivka. Ông từng học tại trường THCS số 12 Makiivka, sau đó tiếp tục theo học tại Học viện Xây dựng và Kiến trúc Quốc gia Donbass.

Từ năm 1999 tới năm 2000, ông từng phục vụ trong một tiểu đoàn tại bán đảo Krym thuộc Vệ binh quốc gia Ukraina.[4][5]

Năm 2002, ông làm việc tại một công ty thương mại có tên là "Solodke Zhyttya".[4][5]